실험 목적에 따라 적절한 방법을 선택하여야 한다.
1.1.3. 실험과정은 data 분석까지 하루에 끝낼 수 있어 간단하며, 손상을 단일세포수준에서 정량이 가능하므로 적은 sample의 양으로도 실험이 가능하며 형광염색에 의해 눈으로 직접 확인 할 수 있다는 여러 장점이 있다. Comet assay는 빠른 시간 내에 간편
Bradford Solution 900µl을 넣고 총량 1ml를 만든다
각각 E-tube를 vortexing후 96 well plate에 200ul씩 넣고 O.D값을 측정한다
측정값을 이용하여 각각의 양에 맞게 protein을 E-tube 2set에 담는다. 그 후 sample buffer를 넣고 95도에서 5분간 끓어준다.
Result
(Protein determination)
다음은 단백질의 농도를 다
1. 서론
환경 모니터링 방법은 화학적 분석방법, 생물학적 접근 방법으로 나눌 수 있다. 화학적 분석방법은 제한된 시료를 이용하여 독성물질의 수계 혹은 생체내 존재 여부, 존재량, 거동 등을 측정 할 수 있다. 그러나 이러한 화학분석 데이터는 독성물질의 위해성을 평가하는데 한계를 지니고 있
2) BCA Assat
현제 Bradford Assay와 함께 가장 많이 쓰이고 있는 단백질 정량방법이다. Lowry assay를 개량한 방법으로 Folin시약 대신 bicinchoninate(BCA)를 사용한다는 차이점이 있다. 단백질이 구리 이온Cu 2+, Cu 1+)을 환원 (Reduction) 시킬 수 있는 성질을 이용한다. 단백질에 의해 환원 된 구리 이온은 BCA용액과 반응
Protein Quantity Method
◈ 단백질을 정량하는데 이용하는 spectroscopic 방법
à 단백질의 UV흡수에 따른 측정법
à Lowry assay
à Bradford dye assay
à the Smith copper/bicinchoninic assay(BCA assay)
☞ Lowry assay, Bradford assay, BCA assay는 단백질에 따른
색변화를 일으킨다.
Absorbance at 280nm(A280)
1. 정량 원리
실험동물을 이용하는 동물실험 (animal experiment)이란, 동물에 실험처치를 하고 그 결과로서 나타나는 동물의 생체반응을 관찰, 측정, 해석하는 것이다. 한편 생물검정(biological assay, bioassay)이란 약물, 화학물질, 생물학적 제재 등의 효력의 단위 혹은 역가에 관해서 동물을 사용하여 정성, 정량적으로 검정
4. Bradford Assay
- Bradford Reagent는 95% ethanol, 88% phosphoric acid, Brilliant Blue G로 이루어져 있다. Ethanol은 유기용매이기 때문에 coomassie blue를 Bradford reagent 내에 잘 용해 시키고, phosphoric acid는 reagent가 산성 조건을 충족시키게 한다. 산성 조건 하에서 Coomassie blue는 doubly-protonated red form이 되기 때문에 6개의 phenyl grou
I. Protein Extraction – Micro Smash MS-100 equipment 사용
<실험 전 준비>
얼음(정사각형 스티로폼), E-tube 총 38개(8개×4세트->extract 옮길 것(sonication), centrifuge 상층액 뜰 것, 정량할 것, western 용/ 6개-> standard곡선 그릴 것), screw tube(cap-tube, 뚜껑 초록색) 8개
1. E-tube에 bead (큰 것 2개, 작은 것 10개) 넣어서 ice-rack에
등이 있다.
2. 단백질 정량법이란 무엇인가?
단백질 농도를 정량하는 방법에는 UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법 등이 있다. 각각의 감도, 간편함, 단백질의 종류에 의한 감도의 차이, 방해물질의 종류와 허용농도 및 반응액의 PH등에 차이가 있으므로 측정한 대상에 따라 적당한 방법을 선택하여야 한다.